《DNA序列分析鉴定HLA新等位基因B*5403》研究课题简介

项目负责人：粟玉萍

课题组成员：粟玉萍   罗志红   宋学辉   彭海波   代   敏

该成果已获得2006年岳阳市科技进步奖三等奖，研究成果论文已在《中华医学临床杂志》专业期刊上发表。

新等位基因HLA-B*5403是在对中华骨髓库造血干细胞志愿捐献者标本进行常规中低分辨HLA基因分型的过程中，因PCR-SSP和PCR-SSO两种分型方法都出现了反应格局异常而被发现的。故基本上可以排除在基因克隆过程中导致的基因突变，强烈提示了发现新等位基因的可能性。通过DNA序列分析，对基因组DNA直接测序结果表明，HLA-B高分辨水平分型为B*400101和另一未知等位基因，与IMGT/HLA序列数据库的序列比较分析表明，此标本携带的基因与其最接近的B*5402的等位基因的区别在于：exon2上24位C >T，30位T>G，33位G>A，486位A>C，487位C>T均为碱基置换，使第8密码子编码的氨基酸由组氨酸（His）变为酪氨酸（Tyr），第10密码子编码的氨基酸由丝氨酸（Ser）变为丙氨酸（Ala），第11密码子编码的氨基酸由缬氨酸（Val）变为蛋氨酸（Met），第162密码子编码的氨基酸由苏氨酸（Thr）变为亮氨酸（Leu）。将上述结果上报世界卫生组织（WHO），并于2004年11月30日由世界卫生组织（WHO） HLA因子命名委员会确认并正式命名为HLA-B*5403。

HLA配型是一种先进的技术，随着分子生物学、细胞遗传学、生物工程学等学科的发展，其应用范围越来越大。目前，此项技术已广泛应用于临床，用来治疗恶性肿瘤性疾病、恶性血液疾病、遗传性疾病等，且疗效肯定，带来了显著的社会效益。利用HLA配型技术来研究和发现新的HLA等位基因，对我国的组织器官和造血干细胞移植领域的研究和发展有着积极和重要的意义，能显著提高我国血液学研究水平。

据统计，我国目前需进行造血干细胞移植的患者有数百万，仅白血病患者每年就新增4万多人。进行造血干细胞移植，首先是在有亲缘关系的兄弟姐妹中寻求供者，其HLA配型相合机率为25％，其次是在社会上无血缘关系的供者中寻求，其HLA配型能够相合的机率为千分之一到万分之一。就我国国情来看，因大多数青少年是独生子女，从兄弟姐妹中寻找供者的机率越来越小。因此，中华骨髓库的建立和各HLA配型实验室针对HLA的深入研究具有重大的意义。我市HLA配型实验室HLA分型数据也已超过45000份，配型成功376例，成功捐献30例。尤其在2003年8月，由我室分型完成的湖南理工学院学生捐献者陈欣，成为中华骨髓库全国联网以后，在非血缘关系中高分辨配型成功并成功捐献第一人，挽救了广州的白血病患者黎当生的生命。这些造血干细胞捐献与移植工作的顺利开展，都是国内HLA领域飞速的重要体现，这不仅给众多实体肿瘤、恶性血液病、遗传性疾病以及免疫缺陷性疾病患者带来了希望，更进一步的促进了社会进步和经济发展。

当前对HLA等位基因进行更深入的研究和探讨，使得HLA新等位基因不断被发现，国际HLA基因数据库不断得到更新，国际HLA领域的空白不断被填补，我国的HLA领域研究也更快的与国际接轨。一方面有效地促进了我国造血干细胞高新领域的发展，另一方面对全世界患者提供安全、及时、有效的造血干细胞，提高患者的生存几率和生存质量，更有着积极的意义。